固時俗之流從兮，又孰能無變化？

覽椒蘭其若茲兮，又況揭車與江離？

惟茲佩之可貴兮，委厥美而歷茲。

芳菲菲而難虧兮，芬至今猶未沬。

——《離騷》

靈香草是古代熏衣防蛀的香料。但此植物葉為深綠色，花冠為黃色，與“黃葉白花”特征不符。而同屬的珍珠菜，葉兩面黃色卷毛，花冠白色，外形特征與“揭車”相符。再者，珍珠菜枝葉含精油，《離騷》中以“揭車”比之杜衡、白芷與江離，可知應(yīng)為戰(zhàn)國時代楚地常用的香料藥材。綜合上述，“揭車”應(yīng)該就是珍珠菜。

珍珠菜的枝葉、根、種子均有療效，古今民間方藥集中多有記載，可用于治療月經(jīng)不調(diào)、婦女白帶、再生障礙性貧血、痢疾，以及跌打損傷、咽喉腫痛、急性淋巴管炎，也可醫(yī)治毒蛇咬傷。唯本植物不見載于主要的草本著作，備受古籍冷落。

此外，近人郭郛的《爾雅注證》，描述“藒車”是唇形科的香青蘭類，該屬植物中國產(chǎn)約30余種，多生長在高山及半干旱地區(qū)，東北、華北、西北、西南地區(qū)都有分布。

香青蘭類的花通常為紫藍色，許多種類全株芳香，葉密被黃色腺毛，但僅白花枝子花、多節(jié)青蘭的花呈白色，很符合《廣志》“黃葉白花”的敘述。

學(xué)名：Lysimachia clethroides Duby

科別：報春花科

一年生草本，莖直立，高可達1米，全株被黃褐色卷。葉互生，卵狀橢圓形至闊披針形，長6～15厘米，寬2～5厘米，兩面亦生黃色卷毛，有黑色斑點；葉緣稍背卷。花總序狀，頂生；合瓣花，花冠白色，長約0.5厘米；花梗長0.5厘米；雄蕊稍短于花冠，花絲稍有毛；花柱稍短于雄蕊。蒴果球形，徑0.2～0.5厘米。廣泛分布于長江以南各省，華北亦產(chǎn)，生長在路旁及山區(qū)草坡上。

《爾雅》里說：“藒(qì)車，乞輿”，是一種香草。生長在海南的山谷里，也產(chǎn)自彭城，高數(shù)尺，長黃葉開白花?！冻~》里說：“畦留夷和藒車香，過去的人常常種植，和今天的蘭草、零陵香類似?！薄洱R民要術(shù)》里說：但凡各種北木如果被蟲蛀食，用藒車香煎熬成湯，晾涼以后澆在樹上就可以防止蟲害。

《爾雅》上說，藒車，是香草。生長在海南的山谷之中，也出產(chǎn)于彭城，其草可高達數(shù)尺，生有黃色的葉子、白色的花朵?！冻o》中也提到藒車香在過去人們常常種植，與如今的蘭草相似。

珍珠菜(藒車香；揭車)的化學(xué)成分分析

1、  頂空固相微萃取-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定珍珠菜中揮發(fā)物

采用頂空固相微萃取(HS-SPME) -氣相色譜-質(zhì)譜(GC-MS)聯(lián)用技術(shù)，首次對珍珠菜葉中的揮發(fā)性成分進行了研究。結(jié)果表明，從珍珠菜莖中鑒定出14個化合物，從葉中鑒定出13個化合物，從花中鑒定出16個化合物。三個部位共有8個化合物，分別占莖、葉和花中鑒定成分的92.99、94.59和90.32%。三種成分中以檸檬烯為主，含量分別達52.59、54.57和44.98%。結(jié)果表明，三種成分的揮發(fā)性成分差異不大;這三部分可能具有相同的藥理作用，可為進一步開發(fā)利用提供一定的理論依據(jù)。

從珍珠菜莖中鑒定出14種化合物，占揮發(fā)性成分的99.35%。其主要揮發(fā)性成分為檸檬烯(52.59%)、檸檬醛A(13.38%)、檸檬醛B(10.68%)、β-月桂烯(6.16%)。從珍珠菜葉中鑒定出13種化合物，占揮發(fā)分的99.99%。主要化合物為檸檬烯(54.57%)、檸檬醛A(14.00%)、檸檬醛B(11.18%)、β-月桂烯(6.32%)。從珍珠菜花中鑒定出16個化合物，主要化合物與莖和葉相同。含量分別為44.98、15.11、11.82和4.95%。檸檬烯、檸檬醛A、檸檬醛B、β-月桂烯、1R-α-蒎烯、莰烯、芳樟醇和石竹烯等主要化合物在葉、莖和花中相互作用，分別占鑒定成分的92.99、94.59和90.32%。三個樣品中檸檬烯含量最高。

珍珠菜中鑒定出14種化合物，占莖總油量的99.35%，13種化合物占葉總油量的99.99%，16種化合物占花總油量的99.77%。其中，1R-α-蒎烯、莰烯、β-月桂烯、檸檬烯、芳樟醇、檸檬醛B、檸檬醛A和石竹烯為三個部位共同具有的化合物，共同具有的化合物比例高達90%。檸檬烯含量約為50%，說明莖、花、葉中揮發(fā)物的含量差異不大；也許這三部分具有相同的藥效。β-月桂烯為無色或淡黃色液體，常有淡香味。它可以用作香料成分。檸檬烯是一種無色液體，具有檸檬香味，可廣泛用于食品香料中。因此，認為這兩種成分都是花的主要香味，可以作為香料的來源。檸檬烯是一種天然的功能性單萜，在食品中被廣泛用作香精香料添加劑。王雪梅的研究表明，檸檬烯對酵母菌和黑曲霉的抗菌能力優(yōu)于山梨酸鉀和苯甲酸鈉(Wang et al.， 2010)。Wang(2005)的研究發(fā)現(xiàn)檸檬烯具有很多藥理作用，如止咳祛痰、抗炎、鎮(zhèn)痛，尤其是抗癌活性較強。廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥工業(yè)。因此，檸檬烯是否是止咳平喘的有效成分還有待進一步研究。

2、離子液體提取法提取的珍珠菜黃酮:高效液相色譜法及抗氧化活性測定

采用超聲波輔助提取-反相高效液相色譜法，以離子液體為提取溶劑，建立同時測定珍珠菜葉中異槲皮苷、黃芪苷、花中槲皮素、山奈酚含量的方法。同時，對不同提取物的抗氧化活性進行了評價。色譜柱為Purospher STAR RP-C18 (4.6 mm × 250 mm, 5?m)，柱溫為25°C，流動相流速為0.6 mL?min?1。檢測波長為360 nm。流動相a和b分別為乙腈-0.4%磷酸(18:82,v/v)、甲醇(a)和0.4%磷酸(b)。異槲皮苷、黃芪苷、槲皮素和山柰酚的線性范圍分別為0.068 ~ 1.64、0.060 ~ 1.44、0.0080 ~ 0.19和0.0077 ~ 0.18?g。4個成分的平均回收率分別為99.17%、98.39%、100.68%和98.81%。采用DPPH、ABTS、FRAP檢測提取物的抗氧化活性。在優(yōu)化條件下，所有試驗溶液均表現(xiàn)出一定的抗氧化活性，且離子液體提取物的抗氧化活性優(yōu)于甲醇提取物。以離子液體為提取溶劑，可有效提取珍珠菜中的活性成分，提高其抗氧化活性，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

建立了基于離子液體的超聲波輔助提取法，提取了異槲皮苷、黃芪苷、槲皮素和山奈酚。與常規(guī)甲醇萃取相比，所提方法具有更高的萃取效率。結(jié)果表明，該方法簡便、快速、綠色、有效。通過真空蒸餾、膜過濾、鹽析和液-液萃取等方法回收液體。該方法具有獨特的性質(zhì)，在中草藥樣品制備中具有廣闊的應(yīng)用前景。

珍珠菜(藒車香，揭車香)的藥理活性

1、珍珠菜黃酮對大鼠肝微粒體細胞色素P450、CYP2E1和CYP3A4活性的影響

建立體外培養(yǎng)體系，研究珍珠菜中槲皮素、山奈酚、異槲皮苷和黃芪苷對大鼠肝微粒體CYP2E1和CYP3A4活性的影響。在培養(yǎng)體系中加入不同濃度的4-硝基酚、睪酮和黃酮類化合物的探針底物。孵育后，采用有效的高效液相色譜(HPLC)方法分離測定相關(guān)代謝物。結(jié)果表明，山奈素對CYP2E1的抑制作用弱，IC50為60.26-2.54μM，而槲皮素和山奈素對CYP3A4的抑制作用中等，IC50分別為18.77-1.69μM和32.65-1.32μM。異槲皮苷和黃芪苷對CYP2E1和CYP3A4活性均無影響。由此推測槲皮素和山奈酚對CYP2E1和CYP3A4活性的抑制作用可能是珍珠菜具有肝保護作用的關(guān)鍵成分。

采用體外大鼠肝微粒體培養(yǎng)法，研究了珍珠菜中槲皮素、山奈酚、異槲皮苷和黃芪苷對CYP2E1和CYP3A4活性的影響。綜上所述，山奈酚對CYP2E1有弱抑制作用，而槲皮素和山奈酚對CYP3A4活性有中度抑制作用。由此可以推測珍珠菜的有效保肝成分為槲皮素和山奈酚，它們對CYP2E1和CYP3A4的活性具有抑制作用。降低CYP2E1和CYP3A4活性可減輕CCl4的生物轉(zhuǎn)化，防止肝損傷物質(zhì)的產(chǎn)生，發(fā)揮肝臟保護作用。當(dāng)然，體內(nèi)和體外的活性可能有所不同，對上述推測的進一步驗證需要通過體內(nèi)實驗來完成。

2、珍珠菜提取物可減輕脂多糖刺激的Raw 264.7巨噬細胞和急性肺損傷小鼠模型的炎癥反應(yīng)

在中國和其他亞洲國家，珍珠菜(Lysimachia clethroides Duby (LC))是一種用于治療水腫、肝炎和炎癥性疾病的傳統(tǒng)中草藥。本研究從體外細胞系和體內(nèi)急性肺損傷(ALI)炎癥動物模型兩方面探討了LC提取物的抗炎作用及其機制。采用脂多糖(LPS)刺激的Raw 264.7小鼠巨噬細胞研究LC提取物對炎癥介質(zhì)如一氧化氮(NO)和促炎細胞因子表達的調(diào)控作用。采用Western blotting或ELISA技術(shù)估計蛋白水平。采用RT-PCR法分析干擾素(IFN)-β的產(chǎn)生。采用脂多糖誘導(dǎo)的ALI小鼠體內(nèi)模型，研究LC提取物的作用。采用高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜技術(shù)對提取物中的活性成分進行評價，并與對照品進行比較。LC提取物預(yù)處理對Raw 264.7細胞中脂多糖刺激的NO釋放、白細胞介素(IL)-1β和IL-6的產(chǎn)生呈劑量依賴性。LC提取物抑制脂多糖刺激的IRF3和STAT1磷酸化。此外，體內(nèi)實驗表明，在脂多糖誘導(dǎo)的ALI小鼠模型中，LC提取物抑制免疫細胞向肺的浸潤和支氣管肺泡灌洗液(BALF)中促炎細胞因子的產(chǎn)生。我們的結(jié)果表明，LC提取物通過調(diào)節(jié)關(guān)鍵的炎癥機制來減弱脂多糖刺激的巨噬細胞的炎癥反應(yīng)，為其傳統(tǒng)應(yīng)用于各種炎癥疾病的治療提供了科學(xué)支持。

最近，來自植物的天然產(chǎn)物顯示出巨大的民族藥理學(xué)重要性，被列為治療各種過敏性和炎癥疾病的首選。珍珠菜，通常被稱為鵝頸黃松果，來自于報春花(Myrsinaceae)科，是一種藥用草藥，在中國和其他亞洲國家使用了幾個世紀，用于治療水腫、肝炎和炎癥。藥理方面，LC被報道具有抗癌作用。然而，LC在抗炎作用中的作用尚未闡明。基于LC在炎癥中的應(yīng)用的傳統(tǒng)聲稱，我們旨在提供LC是否會抑制巨噬細胞活化的科學(xué)證據(jù)，并進一步探索其潛在的分子機制。我們還評估了LC對脂多糖誘導(dǎo)的ALI小鼠模型的體內(nèi)抗炎作用。

本研究表明，LC提取物通過下調(diào)iNOS表達和IL-1β、IL-6等促炎細胞因子抑制NO的產(chǎn)生。NO是一種關(guān)鍵的炎癥介質(zhì)，急性和慢性炎癥均存在NO的過量產(chǎn)生，NO和iNOS的水平與炎癥程度顯著相關(guān)。

巨噬細胞可以被脂多糖激活，脂多糖通過酶iNOS產(chǎn)生過多的NO。最近的研究表明，誘導(dǎo)iNOS需要受到脂多糖刺激RAW 264.7細胞后產(chǎn)生的次級細胞因子的刺激，這些次級細胞因子包括IFN-α/β，以及負責(zé)誘導(dǎo)iNOS的IFN信號。在本研究中，LC抑制脂多糖誘導(dǎo)的IFN-β的產(chǎn)生。結(jié)果表明，LC抑制脂多糖誘導(dǎo)的IFN-β的產(chǎn)生可以部分降低NO的產(chǎn)生。

TLR4可以觸發(fā)MyD88依賴和/或TRIF依賴的信號通路。在MyD88依賴的通路中，有兩種信號級聯(lián)反應(yīng)發(fā)生:一種是通過NF-κB通路，另一種是通過MAPKs通路。NF-κB作為一種可誘導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮著重要作用，對調(diào)節(jié)促炎細胞因子的表達至關(guān)重要。MAPKs在細胞生長和分化中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，控制細胞對促炎細胞因子和應(yīng)激的反應(yīng)以及NF-κB活性。JNK和p38 MAPK通路可被促炎細胞因子(IL-1β和TNF-α)、微生物產(chǎn)物(如LPS)或細胞應(yīng)激激活。然而，細胞外信號- ERK通路被有絲分裂刺激激活。在本研究中，LC提取物顯著增加了JNK的磷酸化，并略微增加了IκB-α的降解。因此，LC處理后JNK磷酸化水平的增加和IκB-α的降解可導(dǎo)致TNF-α分泌的增加。

在TLR3和4信號通路中，炎癥因子的誘導(dǎo)需要依賴于TRIF信號通路。在轉(zhuǎn)錄因子IRF3的激活和NF-κB的晚期激活中，TRIF依賴的信號通路起著關(guān)鍵作用。激活的IRF3進入細胞核，誘導(dǎo)IFN-β的表達。IFN-β通過I型IFN受體和受體相關(guān)激酶如Jak1和Tyk2以自分泌/旁分泌的方式作用于轉(zhuǎn)錄因子STAT1的酪氨酸磷酸化。單獨將STAT1磷酸化為酪氨酸701 (Y701)足以產(chǎn)生具有DNA轉(zhuǎn)錄活性的STAT二聚體，并調(diào)節(jié)iNOS、IL-1β和IL-6，但不能調(diào)節(jié)TNF-α。在本研究中，LC提取物通過抑制IRF3磷酸化顯著抑制lps誘導(dǎo)的IFN-β的產(chǎn)生。IFN-β分泌的減少導(dǎo)致STAT1磷酸化的抑制。因此，通過下調(diào)IFN-β的產(chǎn)生抑制STAT1的激活，iNOS、IL-1β和IL-6的表達水平可能受到抑制。

Poly(I:C)是dsRNA的合成模擬物，是在RNA和DNA病毒復(fù)制過程中產(chǎn)生的一種病原體相關(guān)分子模式(PAMP)，并根據(jù)其定位被不同的受體識別。poly(I:C)加入培養(yǎng)基后，主要由內(nèi)體定位的TLR-3感知，導(dǎo)致TRIF依賴的信號激活和I型IFN和炎癥細胞因子的產(chǎn)生。在本研究中，LC處理抑制了poly(I:C)對RAW 264.7細胞的激活以及隨后增加的促炎細胞因子如IFN-β和TNF-α的產(chǎn)生，表明提取物也抑制了poly(I:C)誘導(dǎo)的TRIF信號通路。

通過氣管途徑給藥的實驗性脂多糖已被廣泛用于體內(nèi)炎癥的生物學(xué)和病理生理學(xué)研究。ALI(Acute Lung Injury, 急性肺損傷)及其最嚴重的表現(xiàn)為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome, ARDS)，是一種以急性低氧血癥性呼吸衰竭、雙側(cè)肺浸潤伴水腫為特征的臨床綜合征。ALI的特點是毛細血管通透性增加，促炎細胞因子，肺泡水腫，以及循環(huán)炎癥細胞包括中性粒細胞的涌入。在我們的研究中，我們發(fā)現(xiàn)LC提取物顯著降低了脂多糖誘導(dǎo)的肺細胞浸潤，免疫組化技術(shù)證實了這一點。在各種免疫細胞中，中性粒細胞在ALI中的重要性得到了研究的支持，這些研究表明，中性粒細胞的減少可以消除或逆轉(zhuǎn)肺損傷。我們發(fā)現(xiàn)，LC提取物顯著降低了BALF中的總細胞水平和中性粒細胞募集。這些發(fā)現(xiàn)可能部分解釋了總細胞和中性粒細胞的減少可能會阻止動物發(fā)生ALI。

多種炎癥介質(zhì)參與了ALI。其中TNF-α和IL-6被認為是天然免疫反應(yīng)中最重要的炎癥介質(zhì)。IL-6是一種公認的炎癥介質(zhì)，在ALI患者和感染性休克動物模型中上調(diào)。最近的一篇報道認為IL-6是誘導(dǎo)與ALI相關(guān)的心血管功能障礙的關(guān)鍵效應(yīng)分子之一，在氣道合成的IL-6易位進入體循環(huán)，導(dǎo)致了這種心血管功能障礙。一旦暴露于脂多糖中，由于肺的通透性增強，使IL-6容易進入體循環(huán)，因此肺成為全身IL-6的主要來源。在ALI中，IL-6減少了脂多糖給藥小鼠氣管內(nèi)TNF-α的釋放。同樣，LC治療降低IL-6可導(dǎo)致TNF-α產(chǎn)生增加。

LC含有蘆丁、異槲皮素等多種黃酮類化合物。早期研究表明蘆丁和異槲皮素具有抗炎活性。HPLC指紋圖譜分析顯示，不同的紫外吸收條件和保留時間下，LC提取物具有顯著的峰。因此，本實驗中使用的LC提取物的抗炎活性可能與其有效成分異槲皮苷和蘆丁有關(guān)。

總之，我們的研究表明，LC提取物抑制NO和促炎細胞因子如IL-1β和IL-6在脂多糖刺激的RAW 264.7細胞中生成。LC提取物還通過抑制中性粒細胞浸潤和降低IL-6的產(chǎn)生，減輕了脂多糖誘導(dǎo)的小鼠ALI模型。根據(jù)我們目前的結(jié)果LC介導(dǎo)的體外和體內(nèi)抗炎作用可能是由調(diào)節(jié)關(guān)鍵的炎癥機制而產(chǎn)生。這是第一份提供科學(xué)證據(jù)證明LC在傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中用于治療各種炎癥性疾病的研究。

參考文獻

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